RBM20和MURC双基因杂合变异对心肌细胞结构和生物学特性的影响

摘要

目的 探讨RNA结合基元蛋白20 (RBM20)和肌肉相关卷曲螺旋蛋白（MURC）双基因杂合变异对人心肌细胞AC16 （成人左心室心肌细胞系）结构和生物学特性的影响。方法 构建对照组、空载组、野生组、MURC或RBM20单基因突变组、RBM20和MURC双基因突变组的心肌细胞AC16；采用Western blotting、免疫荧光染色和实时荧光定量PCR观察心肌细胞中RBM20和MURC定位、细胞表面积、骨架排列、骨架相关蛋白、细胞极性、细胞内钙浓度；采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡；采用Ki-67染色检测心肌细胞增殖；采用划痕实验检测心肌细胞迁移。结果 与RBM20或MURC单基因突变相比，RBM20和MURC双基因突变对心肌细胞结构和生物学特性影响更显著，表现为细胞表面积增大，细胞肥大相关基因肌球蛋白重链7和α肌动蛋白基因m RNA表达升高，骨架排列紊乱度升高，骨架蛋白β-tubulin和Vinculin荧光强度降低（均P <0.01）；极性蛋白Part6荧光强度升高（P <0.05）；心肌细胞凋亡率升高，增殖活性下降，迁移率增高，细胞内钙离子浓度升高（均P <0.01）。结论 RBM20和MURC双基因杂合变异使心肌细胞结构及生物学特性发生改变，表现为细胞表面积增大，骨架排列紊乱，极性改变，凋亡率和迁移率升高，增殖活性和钙处理能力降低。

关键词

RNA结合基元蛋白20 / 肌肉相关卷曲螺旋蛋白 / 双基因杂合变异 / 心肌病