基于AMPK/SIRT1通路探究苦参碱对阿尔茨海默病Aβ_25-35诱导PC12细胞氧化损伤和凋亡的影响

摘要

目的 探讨苦参碱对阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白（Aβ） 25-35诱导PC12细胞凋亡和氧化损伤的影响，并分析其与AMP活化蛋白激酶（AMPK）/沉默信息调节因子（SIRT1）通路的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度苦参碱对PC12细胞生长的影响，最终选择0.5、1.0和1.5 mmol/L苦参碱进行实验。将PC12细胞分为Con组（空白培养细胞），Aβ_25-35组(20μmol/L的Aβ_25-35处理细胞)，Aβ_25-35+Matrine-L组、Aβ_25-35+Matrine-M组、Aβ_25-35+Matrine-H组(20μmol/L的Aβ_25-35和0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L苦参碱处理细胞)。用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（ROS）含量，酶联免疫吸附法检测超氧化的物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平，Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达。结果 与Con组相比，Aβ_25-35组24 h、48 h的吸光度（OD）值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性均降低，凋亡率、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达、ROS含量、IL-6、IL-1β、TNF-α表达增加，p-AMPK、SIRT1蛋白表达上调（均P <0.05）；与Aβ_25-35组相比，Aβ_25-35+Matrine-L组、Aβ_25-35+Matrine-M组、Aβ_25-35+Matrine-H组24 h、48 h的OD值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性增加（P <0.05），凋亡率、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达、ROS含量、IL-6、IL-1β、TNF-α表达降低，p-AMPK、SIRT1蛋白表达下调（P <0.05）。结论 苦参碱可能通过抑制AMPK/SIRT1通路激活，减轻Aβ_25-35诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤。

关键词

苦参碱 / 阿尔茨海默病 / 细胞凋亡 / 氧化应激 / 炎症反应