β淀粉样蛋白_1-42质粒的构建及其与钙调蛋白的结合作用

摘要

目的 探讨β淀粉样蛋白_1-42 (Aβ_1-42)与钙调蛋白（CaM）的结合作用。方法 采用生物信息学方法获取阿尔茨海默病（AD）异常表达的核心基因，预测AD防治的潜在靶蛋白；通过基因重组的方法构建GST-Aβ_1-42重组质粒并进行DNA测序；琼脂糖凝胶电泳进行重组质粒的酶切鉴定；提取纯化GST-Aβ_1-42融合蛋白，SDS-PAGE凝胶电泳鉴定是否纯化成功；GST pull-down检测质粒表达的GST-Aβ_1-42蛋白与CaM的结合作用。结果 获取连接度排名前20的核心基因，将CaM作为靶蛋白；质粒的DNA测序结果证明重组质粒构建成功，琼脂糖凝胶电泳结果显示，酶切后的片段与Aβ_1-42片段分子量大小理论值符合，进一步证明重组质粒构建成功；SDS-PAGE凝胶电泳结果显示GST-Aβ_1-42蛋白能够与CaM结合，并具有浓度依赖性。结论 Aβ_1-42重组质粒构建成功，且与CaM具有结合作用。

关键词

β淀粉样蛋白 / 质粒构建 / 钙调蛋白 / 结合能力 / 活性鉴定