circRNA TCF25靶向miR-128b对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

摘要

目的 探究环状RNA (circRNA)转录因子25 (TCF25)靶向微RNA-128b (miR-128b)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法 收集人乳腺癌细胞MCF-7培养至对数生长期，将MCF-7细胞随机分为空白组（未转染）、si-NC组（转染si-NC）、si-circRNA TCF25组（转染si-circRNA TCF25）、pcDNA-circRNA TCF25组（转染pcDNA-circRNA TCF25）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-128b mimic组（转染miR-128b模拟物）、miR-128b inhibitor组（转染miR-128b抑制剂）、pcDNA-circRNA TCF25+miR-128b mimic组（转染pcDNA-circRNA TCF25和miR-128b模拟物），每组6个复孔。转染48 h后，荧光定量PCR (RT-q PCR)检测各组细胞中circRNA TCF25、miR-128b表达；RNase R酶消化实验进行环状RNA鉴定；核浆分离法检测circRNA TCF25的亚细胞定位；噻唑蓝（MTT）实验检测细胞增殖活力；流式细胞术检测细胞凋亡情况；RT-qPCR检测磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）、细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3 (caspase-3) mRNA表达；Western blotting检测PTEN、Ki-67、caspase-3、活化的caspase-3蛋白表达；双荧光素酶报告实验分析circRNA TCF25与miR-128b的靶向关系。结果 与对照组比较，circRNA TCF25的相对表达量在RNase R酶处理后并无显著变化（P> 0.05），而线性TCF25的相对表达量在经RNase R酶处理后降低（P <0.05）;circRNA TCF25在胞质中的相对表达量高于细胞核（P <0.05）。与空白组和si-NC组比较，si-circRNA TCF25组细胞增殖活力降低，凋亡率升高，Ki-67 mRNA及蛋白表达降低，PTEN、caspase-3、活化的caspase-3 mRNA及蛋白表达升高；pcDNA-circRNA TCF25组细胞增殖活力升高，凋亡率降低，Ki-67 mRNA及蛋白表达升高，PTEN、caspase-3、活化的caspase-3 m RNA及蛋白表达降低，差异均有统计学意义（均P <0.05）。与空白组和miR-NC组比较，miR-128b mimic组细胞增殖活力降低，凋亡率升高，Ki-67 mRNA及蛋白表达降低，PTEN、caspase-3、活化的caspase-3 mRNA及蛋白表达升高，miR-128b inhibitor组细胞增殖活力升高，凋亡率降低，Ki-67 mRNA及蛋白表达升高，PTEN、caspase-3、活化的caspase-3 mRNA及蛋白表达降低，差异均有统计学意义（均P <0.05）。与pcDNA-circRNA TCF25组比较，pcDNA-circRNA TCF25+miR-128b mimic组细胞增殖活力降低，凋亡率升高，Ki-67 mRNA及蛋白表达降低，PTEN、caspase-3、活化的caspase-3 mRNA及蛋白表达升高，差异均有统计学意义（均P <0.05）。双荧光素酶实验结果证实了circRNA TCF25可靶向调控miR-128b。结论 circRNA TCF25可能通过靶向抑制miR-128b表达，促进Ki-67表达，抑制PTEN、caspase-3、活化的caspase-3表达，发挥促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖，抑制其凋亡的作用。

关键词

环状RNA转录因子25 / 微RNA-128b / 乳腺癌 / 增殖 / 凋亡