二氢青蒿素结合SERCA2b诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨二氢青蒿素（DHA）与肌浆/内质网钙ATP酶（SERCA）的结合位点及其通过线粒体途径诱导人结肠癌HCT-116细胞凋亡的作用机制。方法 分别于不同浓度（0,10,20,40μmol/L） DHA环境中培养HCT-116细胞24 h后，用Western blotting检测细胞中SERCA2蛋白表达水平；CCK-8法检测细胞增殖情况；行Hoechst核染色；用JC-1探针检测细胞线粒体膜电位。通过LeDock分子对接方法，预测DHA与SERCA的结合位点。基于生物膜干涉技术，将合成的Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白和非突变蛋白分别与小分子DHA进行结合检测。结果 Western blotting与CCK-8检测结果显示，随着DHA浓度升高，SERCA2蛋白表达水平显著下降，细胞增殖显著降低，并呈剂量相关（P <0.01）。Hoechst核染色显示，DHA诱导了HCT-116细胞核变圆、固缩。JC-1探针检测结果表明，在DHA处理4 h内，线粒体膜电位逐渐降低，其后线粒体膜电位则出现明显降低。分子对接预测提示DHA与Thr316形成氢键相互作用，与Ile315则有疏水相互作用。进一步的生物膜干涉技术提示DHA与SERCA2b非突变蛋白结合信号良好，而与Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白结合信号较差。结论 DHA可直接与SERCA2b的Ile315与Thr316位点结合，并通过线粒体途径诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡。

关键词

二氢青蒿素 / 肌浆/内质网钙ATP酶 / 结直肠肿瘤