N-甲基小檗胺对细胞内钙稳态的调节作用

摘要

目的 探讨N-甲基小檗胺（N-MB）对H9c2心肌细胞内钙稳态的调节作用，从而明确N-MB心肌保护作用的可能机制。方法通过MOE软件预测N-MB与Ca_V1.2通道的结合并判断二者的结合能力与结合模式。通过全细胞膜片钳技术记录稳定表达hCa_V1.2的HEK293细胞内Ca_V1.2钙通道电流的变化，观察N-MB （30μmol/L）对Ca_V1.2钙通道电流的影响。将Fluo 3-AM荧光探针装载至H9c2心肌细胞中，激光共聚焦显微镜检测N-MB （3、30μmol/L）对心肌细胞内Ca²⁺浓度的影响。实时定量PCR检测N-MB （3、30μmol/L）对H9c2心肌细胞中Ca²⁺调控相关基因Cacna1c、Cacnb2、Ryr2、Serca2a、Ncx1表达的影响。结果 经MOE软件预测，N-MB和Ca_V1.2通道可以结合，二者相互作用的结合位点主要涉及Phe1191、Thr1420、Asn771等，作用方式有H-donor、pi-pi、pi-H 3种。N-MB（30μmol/L）对Ca_V1.2钙通道电流可产生明显抑制作用，其抑制率为（76.09±7.41）%。N-MB （3μmol/L、30μmol/L）作用于H9c2心肌细胞后细胞内钙信号的荧光强度明显增强（P <0.01）。与对照组相比，N-MB （30μmol/L）干预后，H9c2心肌细胞Cacna1c、Serca2a、Ncx1表达差异无统计学意义（P> 0.05），而Cacnb2表达显著减少（P <0.001）,Ryr2表达显著增加（P <0.05）。结论 N-MB可以与Ca_V1.2钙通道结合。N-MB可能通过抑制Ca_V1.2钙通道的表达而抑制钙电流；同时可能通过促进Ryr2表达而升高细胞内Ca²⁺浓度来参与调节细胞内钙稳态，发挥其心肌保护作用。

关键词

N-甲基小檗胺 / 细胞内钙稳态 / Ca_V1.2钙通道