利用α-突触核蛋白预制纤维作用于分化的SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型

摘要

目的 探讨利用α-突触核蛋白预形成纤维（α-Syn PFF）作用于视黄酸（RA）分化的SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型的可行性。方法 将SH-SY5Y细胞随机分为未分化组和RA分化组，Western blotting检测酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运蛋白（DAT）、淋巴细胞活化基因3蛋白（LAG3）、巢蛋白（Nestin）表达水平，免疫荧光染色检测微管相关蛋白2 (MAP2)、神经元特异核蛋白（NeuN）表达情况。将经RA分化后的SH-SY5Y细胞随机分为control组和α-Syn PFF组，Hoechst 33342染色检测细胞核固缩情况，一氧化氮（NO）含量检测试剂盒测定细胞内NO生成量，Western blotting检测TH、多聚腺苷酸二磷酸（PAR）、多聚腺苷酸二磷酸核糖酶（PARP）表达水平，免疫荧光染色检测细胞内129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白（p S129-α-Syn）及磷酸化组蛋白H2AX (γH2AX)表达情况。结果 RA处理可诱导SH-SY5Y细胞胞体变小、突起变长。Western blotting结果显示，RA处理可提高SH-SY5Y细胞TH、DAT、LAG3表达水平，降低Nestin表达水平（P <0.05）; α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞TH蛋白表达水平降低，PAR、PARP-1、cleaved PARP-1蛋白表达水平升高（P <0.05）。免疫荧光染色结果显示，RA处理能提高SH-SY5Y细胞MAP2和NeuN表达水平（P <0.001）; α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞γH2AX和p S129-α-Syn的表达水平升高（P <0.01）。Hoechst 33342染色结果显示，α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞核固缩（P <0.001）。NO检测结果显示，α-Syn PFF处理可提高分化的SH-SY5Y细胞内NO含量（P <0.01）。结论 α-Syn PFF作用于RA分化的SH-SY5Y细胞可建立帕金森病细胞模型。

关键词

帕金森病 / α-突触核蛋白预制纤维 / 视黄酸 / SH-SY5Y细胞 / 细胞模型