结直肠癌外泌体诱导肿瘤相关巨噬细胞极化抑制CD8⁺T细胞抗肿瘤活性

摘要

目的 探讨结直肠癌外泌体诱导巨噬细胞极化对CD8+T细胞抗肿瘤活性的影响。方法 M0型巨噬细胞与PBS及HT-29和LoVo细胞外泌体（HT-29 exo和LoVo exo）共孵育48 h （PBS组、HT-29 exo组、LoVo exo组），实时定量PCR检测细胞中M2型巨噬细胞标志物CD206、Arginase-1、IL-10、CD163以及M1型巨噬细胞标志物iNOS和IL-1β mRNA表达量。CD8+T细胞与PBS组、HT-29 exo组和LoVo exo组M0巨噬细胞共孵育48 h （PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组），流式细胞术检测CD8+T细胞中PD-1的表达。将PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8+T细胞分别与HT-29及LoVo细胞共孵育24 h （PBS+M0/CD8+T组，HT-29 exo+M0/CD8+T组和LoVo exo+M0/CD8+T组），ELISA检测细胞上清γ干扰素（IFN-γ）、穿孔素（perforin）和颗粒酶B （granzyme B）浓度，细胞毒性实验检测HT-29和LoVo细胞裂解率。结果 与PBS组相比，HT-29 exo组、LoVo exo组细胞中CD206、Arginase-1、IL-10、CD163 mRNA表达显著上调（P <0.05）,iNOS和IL-1β mRNA表达显著下调（P <0.05）。与PBS+M0组相比，HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8⁺T细胞PD-1表达上调（P <0.001）。与PBS+M0/CD8⁺T组相比，HT-29 exo+M0/CD8+T组和LoVo exo+M0/CD8⁺T组细胞培养上清中IFN-γ、perforin、granzyme B浓度以及HT-29和LoVo细胞裂解率均显著降低（P <0.001）。结论 HT-29 exo和LoVo exo诱导的M2型巨噬细胞可抑制CD8+T细胞抗肿瘤活性。

关键词

结直肠癌 / 外泌体 / 肿瘤相关巨噬细胞 / CD8⁺T细胞