结蛋白介导的雌激素受体对颅内动脉瘤血管平滑肌细胞表型的调控作用

摘要

目的 探讨颅内动脉瘤组织中结蛋白的表达及其通过雌激素受体（ER）对血管平滑肌细胞（VSMC）表型调控的影响。方法 选取非动脉瘤患者手术区颈外动脉分支（正常动脉血管）和颅内动脉瘤切除标本28例。采用免疫组织化学染色法检测正常动脉血管和颅内动脉瘤中结蛋白的表达情况，采用Western blotting和实时定量PCR检测颅内动脉瘤组织及正常血管中结蛋白和DES mRNA的表达。将VSMC分为control组、shNC组、shDesmin组、pcDNA3.1/NC组、pcDNA3.1/Desmin组和pcDNA3.1/Desmin+3-MA组。shNC组、shDesmin组、pcDNA3.1/NC组、pcDNA3.1/Desmin组分别转染shNC、shDesmin、pcDNA3.1/NC和pcDNA3.1/Desmin质粒，pcDNA3.1/Desmin+3-MA组在转染前加入10μmol/L 3-MA预处理6 h。采用实时定量PCR和Western blotting检测VSMC中DES mRNA和结蛋白的表达；用CCK-8实验检测沉默DES对VSMC增殖能力的影响；用Transwell实验检测沉默DES对VSMC迁移能力的影响；用Western blotting检测沉默DES对VSMC中ERα/ERβ比例和表型调节相关蛋白表达水平的影响。结果 结蛋白在颅内动脉瘤组织中的阳性表达率低于正常动脉血管（χ²=16.601,P <0.001）；与shNC组比较，shDesmin组VSMC中结蛋白表达水平降低（P <0.001），细胞增殖力增强（P <0.05），细胞迁移数量增多（P <0.001）,ERα/ERβ比例升高（P <0.001）；与pcDNA3.1/NC组比较，pcDNA3.1/Desmin组VSMC中人平滑肌α肌动蛋白（SM-α-actin）、人平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）蛋白表达水平升高（P <0.01），基质金属蛋白酶-3 （MMP-3）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）蛋白表达水平下降（P <0.05）。与pcDNA3.1/Desmin组比较，pcDNA3.1/Desmin+3-MA组VSMC中SM-α-actin、SM-MHC蛋白表达水平下降（P <0.05）,MMP-3、TNF-α蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论 结蛋白在颅内动脉瘤组织中低表达。沉默DES促进VSMC增殖、迁移，进而可能促进VSMC表型调节。

关键词

颅内动脉瘤 / 结蛋白 / 血管平滑肌细胞 / 雌激素 / 表型调节