miR-10a-5p通过调控Apaf1逆转膀胱癌T24细胞顺铂耐药

摘要

目的 探讨下调miR-10a-5p表达对人膀胱癌T24细胞顺铂（DDP）耐药的影响，并阐明其分子机制。方法 采用实时定量PCR检测人膀胱癌DDP耐药细胞株T24/DDP及其亲本T24细胞中miR-10a-5p的表达水平。将T24/DDP细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-10a-5p inhibitor组、miR-10a-5p inhibitor+si-NC组和miR-10a-5p inhibitor+si-Apaf1组，分别给予不同浓度DDP处理24 h。用MTT法检测各组细胞增殖活性，并计算耐药指数；用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平；用Western blotting检测各组细胞中Apaf1、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及胞质中细胞色素C (Cyt C)等蛋白的表达水平；用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10a-5p与Apaf1的靶向结合关系。结果 与亲本T24细胞比较，T24/DDP细胞中miR-10a-5p表达水平升高（P <0.05）。与inhibitor NC组比较，miR-10a-5p inhibitor组T24/DDP细胞对DDP的敏感性增强，耐药指数降低，凋亡水平升高，且细胞中Apaf1、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及胞质Cyt C等蛋白表达水平升高（均P <0.05）。与miR-10a-5p inhibitor+si-NC组比较，miR-10a-5p inhibitor+si-Apaf1组T24/DDP细胞对DDP敏感性降低，耐药指数升高，凋亡水平降低（均P <0.05）。双萤光素酶报告基因实验结果显示，Apaf1是miR-10a-5p下游靶基因。结论 miR-10a-5p敲低可靶向上调Apaf1，从而逆转T24/DDP细胞对DDP的耐药性。

关键词

膀胱癌 / miR-10a-5p / Apaf1 / 顺铂 / 耐药