钙调蛋白突变体D130V与心肌Ca_V1.2通道IQ基序的相互作用

摘要

目的 探讨钙调蛋白（CaM）突变体D130V与心肌Ca_V1.2通道IQ基序的结合作用。方法 采用折叠识别建模、同源建模和蛋白对接方法预测突变体CaM-D130V与IQ基序的结合；利用42℃精确热击法将质粒转化至大肠杆菌BL-21感受态细胞中，诱导GST融合蛋白表达；超声破碎法提取蛋白，GS-4B beads纯化、PreScission蛋白酶切除GST标签；利用SDS-PAGE检测蛋白纯度；GST pull-down实验检测CaM-D130V与IQ基序的相互作用。结果 蛋白对接结果表明，CaM-WT、CaM-D130V与心肌Ca_V1.2通道IQ基序均具有结合作用，但与CaM-WT相比，突变体CaM-D130V与IQ基序的结合位点减少，且结合构象发生变化，结合能减小（|S|由48.086 6 kcal/mol下降至47.309 5 kcal/mol）。GST pull-down实验结果显示，在2 mmol/L Ca²⁺浓度下，与CaM-WT相比，CaM-D130V与IQ基序的结合量显著减少（P <0.01），亲和力显著降低。结论 CaM-D130V与心肌Ca_V1.2通道IQ基序的结合能力降低，可能导致Ca_V1.2通道功能改变，为探讨CaM突变体相关的心血管疾病的发病机制和靶向治疗提供理论依据。

关键词

钙调蛋白 / 突变体 / 心肌Ca_V1.2通道 / 结合能力 / 长QT综合征