多肽apelin通过调节去乙酰化酶Sirt3表达抑制急性肾损伤向慢性肾脏病转化

摘要

目的 探讨多肽apelin抑制急性肾损伤（AKI）向慢性肾脏病转化的作用机制。方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞，并将细胞分为对照组、顺铂组、顺铂+apelin组、顺铂+apelin+Sirt3 siRNA组和apelin组。采用乙酰化酶Sirt3 siRNA进行细胞转染，用含顺铂（10μmol/L）和（或）apelin-13（1μmol/L）培养基孵育。利用MitoTracker^?探针观察各组线粒体形态；JC-1试剂盒检测各组线粒体膜电位；Western blotting检测各组促纤维化细胞因子、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。选取10周龄雄性C57BL/6J小鼠40只，分为对照组、顺铂组、顺铂+apelin组、顺铂+apelin+Sirt3敲减组、空载腺病毒组，每组8只。除对照组和空载腺病毒组外，其他组小鼠一次性腹腔注射顺铂（20 mg/kg）建立AKI模型。顺铂+apelin组小鼠腹腔注射apelin(0.1μg·kg^-1·d^-1)，对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水；顺铂+apelin+Sirt3敲减组小鼠尾静脉注射Sirt3敲减腺病毒（2×10～9 pfu/mL），腹腔注射apelin-13(0.1μg·kg^-1·d^-1)；空载腺病毒组小鼠尾静脉注射腺病毒（2×10～9 pfu/mL）。干预2周后处死小鼠。Masson染色观察各组肾脏纤维化程度，免疫组织化学染色观察各组Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）表达情况；ELISA检测各组血清肌酐（Cr）和血尿素氮（BUN）水平。结果 细胞实验结果显示，与对照组比较，顺铂组线粒体荧光染色减少，线粒体膜电位下降，TGF-β1表达升高（均P<0.05）。与顺铂组比较，顺铂+apelin组荧光染色增加，线粒体膜电位上升，TGF-β1表达降低（均P<0.05）；而这一效应在Sirt3 siRNA转染后抵消。动物实验结果显示，与对照组比较，顺铂组小鼠肾脏出现显著的肾小管萎缩和肾间质纤维化，Col-Ⅰ阳性表达增多，血清Cr、BUN水平升高（均P<0.05）。与顺铂组相比，顺铂+apelin组上述指标均明显改善（均P<0.05）。与顺铂+apelin组比较，顺铂+apelin+Sirt3敲减组小鼠apelin的肾脏保护作用明显减弱。结论 多肽apelin通过调节去乙酰化酶Sirt3表达来维持线粒体结构和功能的稳定、减轻肾脏纤维化、改善肾功能，抑制AKI向慢性肾脏病转化。

关键词

多肽 / apelin / 去乙酰化酶 / Sirt3 / 急性肾损伤 / 慢性肾脏病