lncRNA MEG3通过调节miR-202-5p/STAT3轴抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

摘要

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)调节miR-202-5p/信号传导及转录激活因子3(STAT3)轴对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 构建H/R细胞模型，随机分为sh-NC组（转染NC-shRNA）,sh-MEG3组（转染lncRNA MEG3 shRNA）,miR-NC组（转染lncRNA MEG3 shRNA+NC-miR）,in-miR-202-5p组（转染lncRNA MEG3 shRNA+miR-202-5p抑制剂），另设置H/R组（未转染的H/R模型细胞），AC16组（正常AC16细胞）。实时定量PCR检测各组细胞lncRNA MEG3、miR-202-5p和STAT3表达；采用CCK-8法检测细胞活力；采用流式细胞仪检测细胞凋亡；采用酶联免疫吸附试验、比色法和探针法分别检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）水平；采用Western blotting检测STAT3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、胱天蛋白酶9(caspase-9)的表达；采用双萤光素酶实验分析lncRNA MEG3和miR-202-5p、miR-202-5p和STAT3关系。结果 与AC16组相比，H/R组细胞lncRNA MEG3和STAT3表达增加，miR-202-5p表达降低（P<0.05）；与H/R组和sh-NC组相比，sh-MEG3组lncRNA MEG3和STAT3表达降低，miR-202-5p表达增加（P<0.05）；与sh-MEG3组和miR-NC组相比，in-miR-202-5p组lncRNA MEG3和STAT3表达增加，miR-202-5p表达降低（P<0.05）。与AC16组相比，H/R组凋亡率、IL-6、TNF-α、MDA、ROS水平及STAT3、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达增加，细胞活力、克隆数、SOD、GSH-Px水平和Bcl-2表达降低（P<0.05）；与H/R组和sh-NC组相比，sh-MEG3组细胞活力、克隆数、SOD、GSH-Px含量和Bcl-2表达增加，凋亡率、IL-6、TNF-α、MDA、ROS水平和STAT3、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达降低（P<0.05）；与sh-MEG3组和miR-NC组相比，in-miR-202-5p组凋亡率、IL-6、TNF-α、MDA、ROS水平和STAT3、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达增加，细胞活力、克隆数、SOD、GSH-Px水平和Bcl-2表达降低（P<0.05）。lncRNA MEG3和miR-202-5p、miR-202-5p和STAT3有多个结合位点。与WT-MEG3+miR-NC组相比，WTMEG3+miR-202-5p组萤光素酶活性降低（P<0.05）；与WT-STAT3+miR-NC组相比，WT-STAT3+miR-202-5p组萤光素酶活性降低（P<0.05）。结论 敲低lncRNA MEG3能通过负调节miR-202-5p下调STAT3，进而抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡。

关键词

长链非编码RNA母系表达基因3 / miR-202-5p/信号传导及转录激活因子3轴 / 缺氧/复氧 / 心肌细胞