TIPE2通过调控MHCⅠ类分子增强CD8⁺T细胞对肺癌细胞的杀伤作用

摘要

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导蛋白8样因子2（TIPE2）对CD8⁺T细胞杀伤肺癌细胞的影响及分子机制。方法将人肺癌细胞系A549分为对照组、LV-NC组（阴性对照LV-NC慢病毒转染）、LV-TIPE2组（LV-TIPE2慢病毒转染），采用实时定量PCR和Western blotting检测TIPE2表达，Western blotting和细胞免疫荧光染色检测主要组织相容性复合体Ⅰ类分子（MHCⅠ）表达。采用免疫磁珠法从人外周血中分离CD8⁺T细胞，流式细胞术检测CD8⁺T细胞纯度，将未转染和转染LV-NC、LV-TIPE2慢病毒的A549细胞分别与CD8⁺T细胞共培养，记为CD8⁺T+A549组、CD8⁺T+LV-NC-A549组、CD8⁺T+LV-TIPE2-A549组，采用细胞毒性（MTT）实验检测CD8⁺T细胞对A549细胞的杀伤能力，流式细胞术检测A549细胞凋亡情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养体系上清液中γ干扰素（INF-γ）和TNF-α的浓度。结果 与对照组、LV-NC组比较，LV-TIPE2组A549细胞中TIPE2 mRNA相对表达量及其蛋白相对表达量均显著上调（P<0.05）,MHCⅠ蛋白相对表达量均显著上调（P<0.05），荧光强度明显增强；分选的CD8⁺T细胞阳性率>90.0%。与CD8⁺T+A549组、CD8⁺T+LV-NC-A549组比较，在同一效靶比（10∶1、20∶1、30∶1）下，CD8⁺T+LV-NC-A549组CD8⁺T细胞对A549细胞的杀伤率显著升高（P<0.05）,A549细胞凋亡率显著增加（P<0.05），上清液中IFN-γ和TNF-α含量也显著增加（P<0.05）。结论 TIPE2可能通过促进肺癌细胞表面MHCⅠ表达，增强CD8⁺T细胞对肺癌细胞的杀伤作用。

关键词

肺癌 / 肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2 / 主要组织相容性复合体Ⅰ类分子