lncRNA FGD5-AS1靶向miR-512-3p/RAB31抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化

摘要

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) FGD5反义RNA 1(FGD5-AS1)、miR-512-3p和Ras相关蛋白31(RAB31)在膀胱癌进展中的作用和调控机制。方法 收集2019年1月至2021年12月于承德医学院附属医院行手术治疗的60例膀胱癌患者肿瘤组织及癌旁组织，并体外培养膀胱癌细胞系（5637、KU-19-19、T24、UM-UC-3）和正常尿路上皮细胞系（SV-HUC-1）。采用实时定量PCR检测肿瘤组织和癌旁组织以及膀胱癌细胞中FGD5-AS1、miR-512-3p和RAB31 mRNA表达，Pearson相关分析确定膀胱癌患者癌组织中miR-512-3p与FGD5-AS1、RAB31 mRNA表达之间的相关性。将sh-NC、sh-FGD5-AS1、sh-FGD5-AS1和NC抑制剂、sh-FGD5-AS1和miR-512-3p抑制剂转染至T24细胞中，分别记为阴性对照组、FGD5-AS1沉默组、抑制剂对照组、联合组；另设置正常组（不转染）。用CCK-8法检测细胞活力；Transwell小室测定细胞迁移和侵袭能力；Western blotting检测RAB31和E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）表达；双萤光素酶报告基因和RNA Pull down实验检测miR-512-3p与FGD5-AS1和RAB31的靶向关系。结果 膀胱癌组织与细胞中FGD5-AS1、RAB31 mRNA呈高表达，miR-512-3p呈低表达（P<0.05），且膀胱癌患者癌组织中FGD5-AS1、RAB31 m RNA的表达与mi R-512-3p表达呈负相关，FGD5-AS1与RAB31 mRNA表达呈正相关（r=-0.779、-0.649、0.652，均P<0.001）。沉默FGD5-AS1可上调miR-512-3p表达，下调RAB31 mRNA和蛋白表达，降低细胞活力、迁移和侵袭数以及N-cadherin、vimentin水平，升高E-cadherin水平（P<0.05）；敲低miR-512-3p表达可明显减弱沉默FGD5-AS1对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭以及上皮-间质转化（EMT）进程的抑制作用（P<0.05）; FGD5-AS1可以海绵化miR-512-3p，而RAB31是miR-512-3p的靶标。结论 沉默FGD5-AS1可能通过上调miR-512-3p、下调RAB31表达抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT进程。

关键词

膀胱癌 / 增殖 / 上皮-间质转化 / 长链非编码RNA FGD5-AS1 / miR-512-3p/Ras相关蛋白31