沉默PAK1通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导胶质母细胞瘤细胞自噬发挥抗肿瘤效应

摘要

目的 探讨沉默p21活化激酶1(PAK1)表达对人胶质母细胞瘤（GBM）细胞生长活性的抑制效应及可能机制。方法 通过GEPIA在线数据库分析GBM患者癌组织中PAK1 mRNA表达及其与患者预后的关系。采用实时定量PCR检测人正常胶质细胞系NHA及不同人GBM细胞系中PAK1 mRNA表达。将U251细胞分为沉默阴性对照（si-NC）组、si-PAK1组、si-PAK1+通路激活剂（740Y-P）组和si-PAK1+自噬抑制剂氯喹（CHQ）组。采用CCK-8法检测细胞增殖活性，平板克隆法检测细胞克隆形成能力，Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时定量PCR检测细胞中PAK1 m RNA表达，Western blotting检测细胞中通路及自噬相关蛋白表达。结果 GBM组织中PAK1 mRNA表达水平明显高于正常脑组织（P<0.05），且PAK1 mRNA高表达的患者预后较差。沉默PAK1表达可明显降低细胞增殖活性（P<0.05），减少细胞克隆团数量，降低细胞迁移及侵袭能力，促进细胞凋亡（P<0.05），下调细胞中p-PI3K、p-AKT、p-m TOR和p62蛋白表达水平，上调Beclin-1蛋白表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值（P<0.05）。740Y-P或CHQ干预处理后，沉默PAK1表达引发的上述变化均被逆转。结论 沉默PAK1表达可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导细胞自噬，从而阻止GBM恶性进展。

关键词

胶质母细胞瘤 / p21活化激酶1 / PI3K/AKT/mTOR信号通路 / 自噬