血竭提取物通过激活caspase-3/GSDME信号通路诱导人食管癌细胞焦亡

摘要

目的 探讨血竭提取物（SDE）调控天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)/消皮素E(GSDME)信号通路对人食管癌细胞焦亡的影响。方法 网络药理学分析血竭活性成分及潜在靶点，并对核心靶点进行富集分析。将人食管癌细胞系EC109细胞分为低、中、高浓度SDE组，caspase-3抑制剂（Ac-DEVD-CHO）组，高浓度SDE+Ac-DEVD-CHO组和对照组，各组细胞处理48 h后用于实验。CCK-8法检测各组细胞活力；扫描电镜观察各组细胞焦亡形态；Hoechst 33342-碘化丙啶（PI）染色检测各组细胞中PI阳性率；试剂盒检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平；DCFH-DA法检测各组细胞中活性氧（ROS）相对荧光强度；Western blotting检测各组细胞裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)、GSDME的N端片段（GSDME-N）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18蛋白表达情况。结果 网络药理学分析结果显示，血竭与细胞焦亡的交集靶点共53个；对度值≥28的7个核心靶点的基因本体论（GO）和京都基因与基因组数据库（KEGG）富集分析结果显示，caspase-3/GSDME信号通路参与焦亡途径。与对照组相比，低、中、高浓度SDE组细胞活力降低，焦亡细胞增多；PI阳性率，上清液中LDH水平，细胞中ROS相对荧光强度及以cleaved caspase-3、GSDME-N、IL-1β、IL-18蛋白表达显著升高（P<0.05）；而Ac-DEVD-CHO组细胞活力升高，焦亡细胞减少；PI阳性率，上清液中LDH水平，细胞中ROS相对荧光强度及cleaved caspase-3、GSDME-N、IL-1β、IL-18蛋白表达显著降低（P<0.05）。与高浓度SDE组相比，高浓度SDE+Ac-DEVD-CHO组细胞活力升高，焦亡细胞减少，PI阳性率，上清液中LDH水平，细胞中ROS相对荧光强度及cleaved caspase-3、GSDME-N、IL-1β、IL-18蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论 SDE可能通过激活caspase-3/GSDME信号通路诱导EC109细胞焦亡。

关键词

血竭提取物 / 食管癌 / 细胞焦亡 / 氧化应激