miR-224-3p调控JAK/STAT信号通路对LPS诱导的椎间盘退变髓核细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响

摘要

目的 探讨miR-224-3p调控Janus激酶/信号转导和转录激活因子（JAK/STAT）信号通路对椎间盘髓核细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响。方法 将髓核细胞分为对照（Control）组、模型（Model，以200μg/mL脂多糖干预）组、miR-224-3p阴性对照（miR-NC）组、miR-224-3p模拟物（miR-224-3p mimics）组、miR-224-3p mimics+JAK1过表达空载体（miR-224-3p mimics+pcDNA-NC）组、miR-224-3p mimics+JAK1过表达质粒（miR-224-3p mimics+JAK1）组。采用实时定量PCR检测细胞miR-224-3p、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-6、可聚蛋白多糖（aggrecan）、胶原蛋白Ⅱ（CollagenⅡ）、JAK1、STAT1 m RNA表达水平；采用CCK-8法检测细胞增殖情况；采用流式细胞术法检测细胞凋亡情况；采用ELISA试剂盒法检测炎性细胞因子水平；采用Western blotting检测JAK1、STAT3、BCL2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、胱天蛋白酶-3(caspase-3)、aggrecan和CollagenⅡ蛋白表达；双萤光素酶报告基因实验验证miR-224-3p与JAK1之间的靶向关系。结果 与Control组相比，Model组髓核细胞miR-224-3p表达下调，JAK1和STAT1表达上调（P<0.05）；过表达miR-224-3p可提高髓核细胞活性、aggrecan和CollagenⅡ表达水平、Bcl-2蛋白表达量，降低细胞凋亡率、TNF-α、IL-6和IL-8水平及p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、caspase-3和Bax蛋白表达量（P<0.05）；同时过表达miR-224-3p和JAK1可降低髓核细胞活性、aggrecan和CollagenⅡ表达水平、Bcl 2蛋白表达量，提高细胞凋亡率、TNF-α、IL-6和IL-8水平及p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、caspase-3和Bax蛋白表达量（P<0.05）。结论 椎间盘退变髓核细胞中miR-224-3p的表达水平显著下调，上调miR-224-3p可通过靶向抑制JAK/STAT信号通路，提高脂多糖诱导的椎间盘髓核细胞活性，抑制细胞凋亡、炎症反应和细胞外基质降解。

关键词

miR-224-3p / Janus激酶/信号转导和转录激活因子 / 椎间盘髓核细胞 / 增殖 / 凋亡 / 炎症反应