香青兰总黄酮对缺氧诱导损伤致HT22细胞铁死亡的影响及其作用机制

摘要

目的 研究香青兰总黄酮（TFDM）对缺氧诱导损伤致HT22细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法 将HT22细胞分为Control组（未处理）、Model组（基于血管性痴呆发病机制，通过缺氧诱导损伤致HT22细胞铁死亡建立模型）、Model+TFDM组（通过缺氧诱导损伤致HT22细胞铁死亡，使用TFDM处理细胞），检测各组细胞活力和谷胱甘肽（GSH）含量；实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting检测各组COX2、GPX4 mRNA和蛋白表达，筛选出缺氧最佳时间和TFDM干预最佳浓度。然后使用铁死亡诱导剂（Erastin）和铁死亡抑制剂（Ferrostatin-1）分别单独和联合TFDM处理细胞。检测各组GSH含量；qRT-PCR和Western blotting检测各组COX2、GPX4 mRNA和蛋白表达；检测各组细胞内Fe²⁺含量；线粒体膜电位荧光探针（JC-1）染色评估各组线粒体膜电位变化；流式细胞术检测各组活性氧（ROS）水平。结果 缺氧诱导HT22细胞损伤最佳时间为36 h,TFDM干预最佳浓度为7.5μg/mL。与Control组比较，Model组细胞活力、GSH含量、线粒体膜电位明显下降，细胞内Fe²⁺及ROS平均荧光强度增加，COX2 mRNA及蛋白表达显著增高（P<0.05）。与Model组比较，Model+TFDM组细胞活力、GSH含量、线粒体膜电位、GPX4 mRNA和蛋白表达显著升高，胞内Fe²⁺及ROS平均荧光强度降低、COX2 mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）。与Model+Erastin组相比，Model+Erastin+TFDM组GSH含量、GPX4 mRNA表达升高，胞内Fe²⁺、ROS平均荧光强度、COX2 mRNA及蛋白表达下降（P<0.05），而线粒体膜电位、GPX4蛋白表达差异无统计学意义（P > 0.05）。与Model+Ferrostatin-1组相比，Model+Ferrostatin-1+TFDM组COX2 m RNA和蛋白表达下降（P<0.05），而GSH含量、GPX4 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 TFDM可以减轻缺氧诱导所致HT22细胞的氧化损伤，降低铁死亡的敏感性，其机制可能是通过减少细胞内Fe²⁺蓄积、降低ROS水平及下调COX2 mRNA和蛋白表达，同时提高线粒体膜电位、增加细胞内GSH含量和上调GPX4 mRNA和蛋白表达来实现的。

关键词

香青兰总黄酮 / 血管性痴呆 / 铁死亡 / 缺氧损伤