扶正解毒祛瘀方通过改变谷氨酰胺代谢抑制非小细胞肺癌顺铂耐药

摘要

目的 研究扶正解毒祛瘀方（FZJDQYF）通过改变谷氨酰胺代谢抑制非小细胞肺癌（NSCLC）顺铂耐药的机制。方法 将A549细胞分别在含葡萄糖或谷氨酰胺的培养基中培养，使用0.15μmol/L顺铂处理14 d后采用集落形成实验检测细胞集落形成情况。Seahorse XF细胞能量代谢分析仪检测A549、A549/DDP细胞线粒体氧消耗率（OCR）。使用试剂盒检测NADPH/NADP⁺和活性氧（ROS）水平。不同FZJDQYF剂量（1.5、7.5、15 g/kg）灌胃小鼠获得的含药血清干预A549/DDP细胞48 h，细胞增殖毒性试验（CCK-8）检测细胞存活率。A549/DDP细胞在含谷氨酰胺的培养基中培养，将其分为正常组（Con组，未处理）、顺铂组（DDP组，0.15μmol/L顺铂处理14 d）,FZJDQYF组（0.15μmol/L顺铂和15 g/kg FZJDQYF灌胃的小鼠含药血清共同处理14 d）。集落形成实验检测各组集落形成情况；Seahorse XF细胞能量代谢分析仪检测各组细胞OCR；使用试剂盒检测各组谷氨酰胺摄取量、NADPH/NADP⁺和ROS水平。Western blotting检测各组谷氨酰胺转运蛋白（SLC1A5）、谷氨酰胺酶（GLS）、多药耐药相关蛋白2（MRP2）、多药耐药蛋白1（MDR1）、P-糖蛋白（Pgp）和肺耐药相关蛋白（LRP）的表达。结果 集落形成实验结果显示，在含谷氨酸培养基中A549细胞可拮抗顺铂诱导的细胞死亡；与A549细胞相比，A549/DDP细胞OCR升高（P<0.05）。A549、A549/DDP细胞顺铂处理14 d后，与A549细胞相比，A549/DDP细胞NADPH/NADP⁺升高，而ROS水平降低（P<0.05）。CCK-8检测结果显示，FZJDQYF能够显著抑制A549/DDP细胞的存活率，且这种效应呈剂量依赖性，15 g/kg FZJDQYF抑制程度最明显。与Con组相比，DDP组谷氨酰胺摄取量增加，OCR、NADPH/NADP⁺水平升高，ROS水平降低（P<0.05）;SLC1A5、GLS、MRP2、MDR1、Pgp和LRP表达显著增加（P<0.05）；与DDP组相比，FZJDQYF组谷氨酰胺摄取量降低，OCR、NADPH/NADP⁺水平降低，ROS水平升高（P<0.05）;SLC1A5、GLS、MRP2、MDR1、Pgp和LRP表达显著减少（P<0.05）。结论 FZJDQYF可抑制NSCLC细胞顺铂耐药，其作用机制可能是通过抑制谷氨酸摄取，改变谷氨酸代谢来实现的。

关键词

扶正解毒祛瘀方 / 谷氨酰胺代谢 / 非小细胞肺癌 / 耐药