禽腺病毒4型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

刘文健; 王帅雯; 吉梅; 刘萌; 汤智辉; 张硕; 宋素泉; 闫丽萍

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (06) : 101 -109.

刘文健, 王帅雯, 吉梅, 刘萌, 汤智辉, 张硕, 宋素泉, 闫丽萍

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

PDF (2625K)

摘要

旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠，通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞，并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株；以制备的单克隆抗体为捕获抗体和酶标检测抗体，通过优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件，建立特异性检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法。结果：本研究成功筛选到3株能够稳定传代的杂交瘤细胞株1H2、2A9和3E1,其分泌的抗体均与FAdV-4全病毒具有良好的反应性，可识别不同抗原表位；进一步发现，以1H2为捕获抗体、2A9为酶标检测抗体，能够建立检测Fiber-2蛋白的ELISA方法；该方法具有良好的重复性，批内重复及批间重复试验变异系数均小于10%;敏感性高，Fiber-2蛋白检测限为0.078 ng/μL;特异性好，不与FAdV-4的其他结构蛋白及鸭腺病毒3型的Fiber-2蛋白发生反应。综上，本研究成功制备了3株Fiber-2蛋白单克隆抗体，并建立了定量检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法，为后续FAdV-4基础研究和Fiber-2亚单位疫苗研究奠定了物质基础。