胸膜肺炎放线杆菌ApxⅠ蛋白单克隆抗体制备和抗原表位初步鉴定

摘要

为了制备胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)Ⅰ型ApxⅠ毒素(ApxⅠ)AI2蛋白特异性单克隆抗体，进而建立用于评估亚单位疫苗免疫效果的阻断ELISA方法，以实验室前期筛选得到的ApxⅠ抗原优势决定簇AI2重组蛋白为免疫原，免疫6周龄BALB/c雌鼠。利用常规细胞融合和间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，获得4株单克隆抗体，命名为2C2、4E4、5E7和6F2,上清液效价分别为1∶6 400、1∶6 400、 1∶12 800和1∶6 400。ELISA与Western blot结果表明，制备的4株单克隆抗体均与重组AI2蛋白有良好的反应性。其中5E7可与APP天然ApxⅠ毒素蛋白特异性结合，同时4株单克隆抗体均不与多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏菌、猪丹毒丝菌、副猪格拉菌和猪链球菌2型反应。亚类分型结果表明，2C2、4E4、5E7属于IgG1亚类，6F2属IgG2a亚类，4株单抗轻链均为κ链。通过构建AI2重组蛋白截短体，初步确定线性表位在74～93 aa之间。本研究成功制备了4株针对AI2蛋白单克隆抗体，为APP亚单位疫苗免疫效果评估方法的建立奠定了基础。

关键词

胸膜肺炎放线杆菌 / AI2蛋白 / 单克隆抗体 / 抗原表位