犬细小病毒层析纯化方法的建立

代昕宇; 胡博; 邓效禹; 张成琪; 李昀真; 李甜甜; 孙亚杰; 许丽文; 白雪

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (04) : 49 -53.

犬细小病毒层析纯化方法的建立

代昕宇, 胡博, 邓效禹, 张成琪, 李昀真, 李甜甜, 孙亚杰, 许丽文, 白雪

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摘要

病毒纯度是抗体制备和疫苗免疫效果提升的关键，本文利用Purose shell V15离子交换层析和Sepharose 4FF分子筛层析分别建立了犬细小病毒(CPV)的纯化方法。将CPV经过离心澄清和膜包浓缩后，用AKTA蛋白纯化仪结合Purose shell V15和Sepharose 4FF分别进行纯化，最后使用超滤管浓缩，通过病毒含量测定、总蛋白回收率测定、SDS-PAGE、Western blot和电镜观察分析病毒的纯化效果。结果：2种方法纯化后病毒形态典型，病毒颗粒大小约20 nm,总蛋白去除率97%以上，回收率71%以上；Purose shell V15纯化后的病毒经SDS-PAGE和Western blot分析显示无细胞成分的杂带，而Sepharose 4FF纯化后的病毒有少量的牛血清白蛋白条带。本试验结果表明这2种方法均可用于CPV的纯化，Purose shell V15纯化后的病毒纯度更高。