阪崎克罗诺杆菌双抗夹心酶联免疫吸附检测方法的建立

摘要

为建立阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的免疫学快速检测方法，分别制备了阪崎克罗诺杆菌的特异性单抗和多抗，建立阪崎克罗诺杆菌的双抗夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA检测方法。结果：获得4株抗阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体阳性细胞株，分泌抗体效价分别是1∶128 000、1∶32 000、1∶256 000和1∶256 000,抗阪崎克罗诺杆菌兔多克隆抗体效价是1∶128 000。建立的阪崎克罗诺杆菌DAS-ELISA检测方法，分别以抗阪崎克罗诺杆菌兔多抗和单抗作为捕获抗体和检测抗体，兔多抗的最佳稀释度为1∶4 000,单克隆抗体最佳稀释度为1∶1 000,灵敏性可达1×10~6 CFU/mL;该检测方法具有良好的特异性，与常见的6种食源性病原菌都没有交叉反应，且能够同时检测6种克罗诺杆菌属细菌；重复性结果显示，该检测方法的批内批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。综上，利用抗阪崎克罗诺杆菌的单抗和兔多抗成功建立了DAS-ELISA方法，该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，可为阪崎克罗诺杆菌的快速检测提供技术支撑。

关键词

阪崎克罗诺杆菌 / 单克隆抗体 / 双抗体夹心ELISA

基金资助

上海市科技兴农重点攻关项目(2020-02-08-00-08-F01489); 上海市科学技术委员会科研计划项目(21N31901000); 国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(2018YFE0102200); 兵团财政科技计划项目(2020AB025-03); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2020JB07)