猪轮状病毒G1P[7]株分离鉴定及多克隆抗体制备

摘要

旨在明确猪场腹泻原因并分离猪轮状病毒(PoRV)。采集腹泻猪粪便，经RT-PCR检测为阳性的样品接种于单层细胞，通过细胞病变(CPE)和间接免疫荧光(IFA)来检测病毒增殖；RT-PCR扩增VP4和VP7基因并测序以确定G/P基因型，生物信息学软件分析VP4和VP7基因的遗传进化特征；传代病毒灭活后制苗接种家兔制备多克隆抗体，测定中和抗体，并经Western blot和IFA鉴定其特异性。结果：猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、伪狂犬病毒(PRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)均为阴性，只有PoRV为阳性；过滤粪便样接种单层MA104细胞，连续传5代均可观察到以细胞圆缩、最后瓦解脱落为特征的CPE,IFA检测到PoRV的特异性荧光，表明病毒分离成功，命名为JSNJ2019;分离株连续传代，病毒滴度逐步升高，介于10~5～10~(6.5) TCID_(50)/mL;分离株JSNJ2019为G1P[7]基因型；3次免疫后家兔血清的中和抗体滴度最高可达2~(11),Western blot出现特异性条带且IFA荧光亮而特异。本研究成功分离PoRV JSNJ2019(G1P[7])且免疫原性良好，制备的多克隆抗体特异性强，为研究PoRV致病机制奠定基础。

关键词

猪轮状病毒 / 分离鉴定 / 基因型 / 免疫原性 / 多克隆抗体