穿心莲内酯对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌关键耐药蛋白PBP2a的抑制作用

摘要

本试验旨在为探究穿心莲内酯(andrographolide, AP)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)关键耐药蛋白青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a, PBP2a)的抑制作用。采用实时荧光定量PCR检测AP对PBP2a编码基因mecA的转录影响，通过在线软件SWISS-MODEL等对蛋白质结构进行分析，经PyMOL以及AutoDock Tools软件进行分子对接来探究AP与PBP2a结合的可能机制，运用动力学模拟来验证AP与PBP2a蛋白结合的可靠性，进一步原核表达PBP2a并制备其多克隆抗体，通过蛋白质免疫印迹检测AP作用下MRSA中PBP2a蛋白含量的变化。结果显示：64μg/mL的AP即可显著下调mecA的转录水平，AP与PBP2a蛋白的GLU170、GLU239和THR238之间可以形成稳定的氢键作用力；成功表达并纯化获得38 kDa的PBP2a蛋白转肽酶区，且制备出的多克隆抗体可以与PBP2a蛋白特异性结合；随着AP浓度的升高，PBP2a的表达量逐渐降低。总之，本研究分子模拟提示AP对PBP2a蛋白存在抑制潜力，试验结果表明AP可以通过抑制mecA的转录进而抑制PBP2a表达，从而揭示了AP使MRSA对β-内酰胺类抗生素增敏的可能机制。

关键词

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 / PBP2a / 穿心莲内酯 / 分子模拟