禽腺病毒4型Penton和Fiber1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

方天; 李乔斌; 冯孝傲; 朱二鹏; 陈常秀; 程振涛

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (03) : 54 -61.

方天, 李乔斌, 冯孝傲, 朱二鹏, 陈常秀, 程振涛

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摘要

为开展禽腺病毒4型(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton)和纤丝蛋白(Fiber1)多克隆抗体的制备及评价，研究通过对Penton和Fiber1基因优势抗原表位基因片段进行生物信息学分析，设计特异性引物PCR扩增获得Penton和Fiber1优势抗原表位基因片段，将其克隆至原核表达载体pColdⅠ,转入表达宿主菌BL21(DE3)进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，将纯化、鉴定后的目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，对抗体进行Western blot鉴定及间接ELISA抗体效价测定。结果可见，FAdV-4 Penton基因序列共编码525个氨基酸，Fiber1基因序列共编码432个氨基酸，其优势抗原表位点分别有7、6个区域，且均集中于N端；成功构建pColdⅠ-P和pColdⅠ-F1重组原核表达质粒，其诱导表达的重组蛋白Penton和Fiber1均与His标签单抗发生特异性反应，动物免疫获得的Penton、Fiber1多克隆抗体均能与目的蛋白反应形成特异性条带，且Penton多克隆抗体效价高于Fiber1多克隆抗体。综上，研究获得的纯化重组蛋白Penton较Fiber1蛋白表达量更高，免疫后血清抗体效价更高，更具有制备多克隆抗体的优势。