猪源和犬源ELF4蛋白的亚细胞定位比较研究

高翠翠; 喻娇; 唐青海; 侯鑫军; 刘婷; 全飞杨; 刘建行; 赵婷芳; 赵铖; 朱钰英; 危艳武

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (03) : 45 -53.

高翠翠, 喻娇, 唐青海, 侯鑫军, 刘婷, 全飞杨, 刘建行, 赵婷芳, 赵铖, 朱钰英, 危艳武

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摘要

本研究旨在对比分析猪E74样因子4(sELF4)和犬E74样因子4(cELF4)的亚细胞定位，为深入开展二者功能研究提供依据。利用PCR截短扩增sELF4和cELF4,分别克隆至真核表达载体pEGFP-C1中，构建17个sELF4重组真核表达载体和13个cELF4重组真核表达质粒，转染HeLa细胞、Hoechst33342染色，荧光倒置显微镜观察亚细胞定位，运用生物信息学软件分析其编码氨基酸序列特征。结果表明，sELF4和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中，sELF4 196～291 aa(586～873 bp)之间有可能存在两个细胞质核定位信号肽，cELF4的核定位信号肽分布在203～291 aa(607～873 bp),cELF4 292～663 aa(874～1 992 bp)、sELF4 292～662 aa(874～1 989 bp)在细胞中发生聚集现象。cELF4与sELF4氨基酸序列在第169～303位氨基酸之间均高度保守，其他区段均存在不同程度的差异。综上，sELF4蛋白全长和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中，截短表达的羧基端功能区有聚集现象，二者的核定位信号肽分布有一定差异。