猪源和犬源ELF4蛋白的亚细胞定位比较研究

摘要

本研究旨在对比分析猪E74样因子4(sELF4)和犬E74样因子4(cELF4)的亚细胞定位，为深入开展二者功能研究提供依据。利用PCR截短扩增sELF4和cELF4,分别克隆至真核表达载体pEGFP-C1中，构建17个sELF4重组真核表达载体和13个cELF4重组真核表达质粒，转染HeLa细胞、Hoechst33342染色，荧光倒置显微镜观察亚细胞定位，运用生物信息学软件分析其编码氨基酸序列特征。结果表明，sELF4和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中，sELF4 196～291 aa(586～873 bp)之间有可能存在两个细胞质核定位信号肽，cELF4的核定位信号肽分布在203～291 aa(607～873 bp),cELF4 292～663 aa(874～1 992 bp)、sELF4 292～662 aa(874～1 989 bp)在细胞中发生聚集现象。cELF4与sELF4氨基酸序列在第169～303位氨基酸之间均高度保守，其他区段均存在不同程度的差异。综上，sELF4蛋白全长和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中，截短表达的羧基端功能区有聚集现象，二者的核定位信号肽分布有一定差异。

关键词

猪ELF4蛋白 / 犬ELF4蛋白 / 真核表达 / 亚细胞定位

基金资助

国家级大学创新创业训练项目(cxcy2022001); 湖南省自然科学基金面上项目(2021JJ30060); 湖南省教育厅科学研究项目重点项目(21A0442); 湖南省重点研发计划项目(2021NK2026); 2022年中央引导地方科技发展资金项目(2022ZYC091)