重组CRM_(197)-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价

摘要

通过大肠杆菌表达系统对CRM_(197)-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达，采用不同种类佐剂制备疫苗，研究其对大鼠的免疫去势作用，为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM_(197))与4拷贝GnRH串联，将CRM_(197)-4GnRH基因与表达载体连接，并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件，用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化，制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠，测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示，重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基，IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验，表明目标融合蛋白已成功表达；动物试验结果表明，重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓度显著下降(P<0.05),表明这3种疫苗具有良好的免疫去势作用。研究结果为GnRH免疫去势疫苗的研制奠定了基础。

关键词

CRM_(197) / GnRH / 大鼠 / 免疫去势