腹泻奶牛源大肠杆菌的分离鉴定及中药的体外抑菌效果

摘要

为了研究贵州毕节某奶牛场荷斯坦奶牛发生腹泻的原因，从该奶牛场采集50份新鲜粪便样本，通过平板划线法对大肠杆菌进行分离纯化和PCR鉴定，采用K-B纸片法进行药物敏感试验，并对多种耐药基因进行PCR检测。针对多重耐药菌，选取虎耳草和杜鹃花2种中草药进行体外抑菌效果研究。结果显示：从腹泻奶牛粪便中分离出31株细菌，其菌落形态和生化特性与大肠杆菌相符；16S rRNA基因测序比对发现该牛场分离的菌株与NCBI数据库中大肠杆菌参考菌株的同源性达到99.65%～99.86%,确定该奶牛场的腹泻病原为大肠杆菌；药敏试验发现该牛场来源的大肠杆菌对多种抗生素(强力霉素、红霉素、青霉素G和四环素)耐药，而对磺胺异恶唑、头孢曲松、环丙沙星、庆大霉素、多黏菌素B、磷霉素等10种抗生素敏感；PCR扩增相关耐药基因发现，导致该牛场腹泻的大肠杆菌携带2种β-内酰胺类(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)),4种四环素类(TetD、TetB、TetK、TetD、TetA),2种氨基糖苷类(ant(3″)-Ia、rmtB)和3种喹诺酮类(qnrS、qepA、oqxA)耐药基因。体外抑菌研究发现，杜鹃花(3.125 mg/mL)的水提物有显著的抑菌效果。试验结果可为该奶牛场防治大肠杆菌性腹泻提供用药指导，同时为开发替抗中草药产品提供了依据。

关键词

腹泻 / 大肠杆菌 / 分离鉴定 / 耐药性 / 耐药基因

基金资助

威宁黄牛营养调控及粗饲料高效利用关键技术研究与示范贵州省科技支撑计划项目(黔科合支撑[2021]一般153); 喀斯特山区粮改饲技术集成示范与产业化(黔科合服企[2021]12-03号); 农业农村部国家肉牛牦牛产业技术体系毕节试验站(CARC-37); 贵州省威宁县威宁黄牛繁育基地贵州省第六批人才基地项目(黔人领发[2018]3号)