猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定

摘要

旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta (DE3)感受态细胞中，利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱导16 h,收集诱导后的菌体，超声破碎并收集其上清液，通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物，并建立体外解旋反应体系，验证蛋白的RNA解旋活性，并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13蛋白对RNA的解旋情况，进一步验证其活性。结果表明，在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13蛋白，纯化后蛋白浓度可达0.9 mg/mL;通过体外解旋试验，验证了PEDV Nsp13蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性，并发现PEDV Nsp13蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高。本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13的RNA解旋作用机制奠定了基础。

关键词

PEDV / Nsp13 / 可溶性表达 / 蛋白纯化 / RNA解旋活性

基金资助

国家自然科学基金青年基金项目(32000028); 中国博士后基金面上基金项目(2020M681649); 江苏省博士后科研资助项目(2020Z120)