大片吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆表达和免疫原性分析

摘要

磷酸丙糖异构酶(TPI)是生物体糖酵解的一种关键酶，对大片吸虫获取能量而赖以生存有着十分重要的作用。本试验根据肝片吸虫TPI (GenBank:KC164346.1)的基因序列，设计带有BamHⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物，以大片吸虫的cDNA为模板，扩增大片吸虫磷酸丙糖异构酶(FgTPI)基因。结果：FgTPI基因开放阅读框为762 bp,编码253个氨基酸，理论等电点pI为8.07;构建的重组表达质粒FgTPI-pET-28a(+)成功在大肠杆菌中表达，重组蛋白的分子量约为32 kDa;重组蛋白免疫BALB/c小鼠，收取多克隆抗体，ELISA检测结果显示，rFgTPI能诱导较高的IgG抗体水平；用感染大片吸虫动物的血清检测重组蛋白的免疫原性，Western blot分析表明，重组蛋白rFgTPI具有良好的免疫原性；生物信息学预测显示，FgTPI主要以α螺旋和β折叠为主，β转角较少，有3个较长的无规则卷曲；通过α-磷酸甘油脱氢酶偶联法测定其活性，发现FgTPI酶促反应最佳pH值为7.5,最适温度为35℃。本试验结果为深入研究FgTPI的生物学功能、评价其作为抗大片吸虫病疫苗候选分子奠定了基础。

关键词

大片吸虫 / 磷酸丙糖异构酶 / 克隆 / 表达 / 酶活性分析