猪链球菌2型核糖核酸酶Ⅲ的克隆表达及催化特性分析

摘要

为了研究猪链球菌2型(SS2)核糖核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ)的催化特性，利用大肠杆菌BL21(DE3)异源表达猪链球菌2型RNaseⅢ(SS-RNaseⅢ)并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化。异源表达研究显示，重组蛋白RNaseⅢ大部分为可溶性表达；催化特性研究显示，RNaseⅢ主要依赖Mg~(2+)或Mn~(2+)发挥催化功能，并在不同离子浓度和pH值环境下具有不同的催化活性；底物特异性研究显示，RNaseⅢ特异性切割长度为30 bp的双链RNA,同时对内源性的rnc mRNA和5S rRNA具有良好的特异性。上述结果表明，相较于其他细菌RNaseⅢ,SS-RNaseⅢ具有独特的催化特性，为深入理解RNaseⅢ如何介导SS2致病机制奠定了基础。

关键词

猪链球菌2型 / 核糖核酸酶Ⅲ / 原核表达 / 催化特性