应用于RPA nfo反应产物结果可视化的胶体金试纸条制备与评价

摘要

旨在利用6-羧基荧光素(6-FAM)与6-FAM单克隆抗体、生物素与链霉亲和素之间的特异性结合，制备可用于nfo酶切割探针的重组酶聚合酶(RPA)反应产物结果可视化的胶体金侧向免疫层析试纸条(GICS)。通过杂交瘤法和诱生腹水法制备了高亲和力的6-FAM单克隆抗体(亲和力常数为5.38×10~9 L/mol),再运用高浓度NaCl破坏试验，确定了胶体金与6-FAM抗体的最佳标记pH值为8.0,最佳抗体标记量为12μg/mL,并使用模拟样本确定了最佳检测(T)线包被缓冲液为0.2 mol/L(pH值5.0)。然后使用RPA nfo反应产物作为实际样本，观察条带的深浅，最终确定在层析液为0.1 mol/L PB(pH值7.4)、T线包被1 mg/mL SA、反应液用量5μL及金标抗体用量10μL条件下，能实现试纸条最佳检测性能。自主研发的胶体金侧向免疫层析试纸条在加样5 min后能出现清晰的条带，与目前商品化试纸条的可视化判定结果一致，能替代现有的商品化试纸条，降低检测成本、缩短检测时间，对建立RPA nfo-GICS及RPA-CRISPR Cas12a-GICS检测方法奠定了基础。

关键词

6-FAM单克隆抗体 / 生物素-链霉亲和素系统 / RPA nfo / 胶体金侧向免疫层析试纸条