表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定

付宁宁; 肖长广; 陈梦莉; 邱亚峰; 李宗杰; 李蓓蓓; 刘珂; 邵东华; 马志永; 魏建超

畜牧与兽医 ›› 2023, Vol. 55 ›› Issue (12) : 105 -110.

付宁宁, 肖长广, 陈梦莉, 邱亚峰, 李宗杰, 李蓓蓓, 刘珂, 邵东华, 马志永, 魏建超

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摘要

旨在通过慢病毒表达系统构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N蛋白的Marc-145细胞系。以PRRSV SH1株感染性克隆质粒为模板，通过PCR扩增N基因，并将其克隆到慢病毒载体中，获得重组慢病毒质粒pSin-Ires-Puro-N,将重组质粒pSin-Ires-Puro-N与辅助质粒psPAS2、pMD2.G、pRSV-Rev共转染293T细胞进行慢病毒包装，获得表达N蛋白的重组慢病毒颗粒并将其感染Marc-145细胞，嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，筛选几代后的细胞采用有限稀释法和终点稀释法获得稳定表达N蛋白的Marc-145细胞系。通过PCR鉴定表明细胞系中存在N蛋白基因，通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验验证N蛋白能在细胞系中能稳定表达。本研究成功构建了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系，为研制PRRSV新型复制缺陷型疫苗奠定基础。