弓形虫529重复序列检测方法的比较

殷位刚; 朱银银; 杨佩才; 张洪英

畜牧与兽医 ›› 2023, Vol. 55 ›› Issue (12) : 111 -116.

弓形虫529重复序列检测方法的比较

殷位刚, 朱银银, 杨佩才, 张洪英

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

摘要

旨在通过比较针对弓形虫529 bp重复序列片段(Rep-529)的环介导等温扩增(LAMP)和荧光定量PCR(qPCR),筛选出较优的弓形虫DNA检测方法，并初步应用于宠物猫弓形虫感染检测。试验以含有弓形虫Rep-529的质粒作为模板，比较文献报道和自主设计的引物组的最低检测限，并用其他病原DNA进行交叉反应性测试，用筛选出的最优引物组对宠物猫粪中弓形虫DNA进行检测。结果表明：以包含Rep-529的质粒为模板比较检出限，LAMP 529-11引物组检测限最低，为10~3 copies/μL;其次为文献报道的LAMP RE引物组和qPCR引物组，检测限均为10~4 copies/μL;LAMP 529-3和2021引物组的检测限最高，均为10~5 copies/μL;各引物组对隐孢子虫、贾第鞭毛虫、旋毛虫、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、细小病毒DNA均无扩增；用LAMP 529-11引物组，对39只宠物猫弓形虫总检出率为33.33%(13/39),其中29份粪便中检出11份阳性(37.93%,11/29),10份肛拭子中检出2份阳性(20.00%,2/10)。总之，以弓形虫Rep-529重复序列为靶基因，本研究筛选获得的LAMP 529-11引物组快速、敏感且特异，在30 min内对弓形虫DNA进行有效扩增；用该法检测发现，33.33%的宠物猫正在排出卵囊，对环境和人类具有较大的潜在污染和传染风险。