牛传染性鼻气管炎gE基因TaqMan-MGB与SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用

摘要

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的荧光定量检测方法，本研究根据IBRV gE基因的序列设计了相应的探针和引物，分别建立TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法，并对2种方法进行了综合比较。结果显示，TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ定量荧光PCR方法的灵敏度分别达到1.0×10~1 copies/μL和1.0×10~2 copies/μL;2种荧光定量方法对除IBRV的其他牛病毒和细菌检测结果均为阴性；重复性检测中变异系数均小于2.3%;检测了130份来自西藏的牦牛样品，2种荧光定量PCR阳性检出率均为100%。以上结果表明，2种荧光定量方法都可用于检测IBRV,且TaqMan-MGB荧光定量PCR敏感性高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR。

关键词

牛传染性鼻气管炎病毒 / TaqMan-MGB荧光定量PCR / SYBR GreenⅠ荧光定量PCR

基金资助

西藏自治区科技厅重点项目(XZ202101ZD0002N); 西藏自治区重点研发计划(XZ202001ZY0044N); 国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-37); 西藏自治区科技厅2023年度重点研发计划项目(XZ202301ZY0016N)