原花青素下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用机制

摘要

旨在研究葡萄籽原花青素(grape seed procyanidins, GSP)抑制颗粒细胞氧化损伤的作用及其可能机制。腹腔注射3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid, 3-NP)诱导小鼠卵泡氧化损伤，并补充GSP进行干预处理；体外分离培养小鼠卵巢颗粒细胞，通过抑制或过表达miR-181a,研究原花青素B2(grape seed procyanidin B2,GSPB2)通过下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用。采用定量PCR方法检测miR-181a表达水平，应用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium, MTT)法检测细胞活力，利用免疫组化法检测活化天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3),应用酶标仪法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性，采用双荧光素酶报告基因检测miR-181a和转化生长因子β受体Ⅰ(TGFBR1)的靶向调控关系，使用原位末端标记法(TUNEL)染色检测颗粒细胞凋亡情况，应用Western blot法检测TGFBR1蛋白水平。结果显示：在动物试验中，与对照组相比，3-NP组颗粒细胞活力显著降低(P<0.05);同时caspase-3活性、cleaved caspase-3蛋白及miR-181a表达明显升高(P<0.05);而GSP干预处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05)。双荧光素酶报告试验结果显示，TGFBR1为miR-181a的靶基因；进一步分析发现，与对照组相比，miR-181a模拟物转染后TGFBR1蛋白表达和细胞活力均显著降低(P<0.05),而miR-181a抑制剂转染后TGFBR1蛋白表达和细胞活力均显著升高(P<0.05)。在细胞试验中，与对照组比较，H_2O_2组细胞中miR-181a表达升高，TGFBR1表达降低(P<0.05),细胞活力下降，caspase-3活性和细胞凋亡率均显著升高；而GSPB2预处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05)。综上，GSP可抑制颗粒细胞的氧化损伤，其作用可能是通过抑制miR-181a表达而调控TGFBR1表达实现。

关键词

葡萄籽原花青素 / miR-181a / 转化生长因子β受体Ⅰ / 颗粒细胞 / 氧化损伤