赤羽病病毒G1蛋白生物信息学分析及截短基因的真核表达

摘要

为得到赤羽病病毒(AKV)G1蛋白的截短表达产物作为诊断抗原，通过PCR扩增、酶切、连接、转化等技术手段，成功克隆出优势抗原结合表位区Thr189-Val 397对应的目的基因G1-2。将目的基因克隆至昆虫杆状病毒表达载体pFastBac HTB,将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞，得到重组穿梭质粒Bacmid-AKV-G1-2,用Cellfectin ReagentⅡ介导转染sf9细胞，获得重组蛋白，Western blot法检测和分析重组蛋白表达情况。软件分析结果表明189～397 aa肽段为亲水性蛋白，存在跨膜区，该蛋白存在多个潜在的磷酸化位点，具有丰富的潜在抗原表位，属于优势抗原肽段，选取该肽段进行截短真核表达，以AKV抗体阳性血清进行Western blot鉴定，重组蛋白能被特异性识别，出现预期蛋白反应条带，表明G1-2蛋白成功表达，分子量约为27 kDa。本研究为进一步开展截短表达产物为抗原的赤羽病病毒诊断试剂研制奠定了基础。

关键词

赤羽病病毒 / G1蛋白 / 杆状病毒表达 / 生物信息学 / 截短表达