非洲猪瘟病毒数字PCR检测方法的建立及比较

赵晓娜; 谭笑; 朱忠武; 周萍; 祝贺; 陆冠亚; 史敏; 沈炜; 唐泰山; 祝长青; 孔繁德

畜牧与兽医 ›› 2023, Vol. 55 ›› Issue (10) : 89 -94.

赵晓娜, 谭笑, 朱忠武, 周萍, 祝贺, 陆冠亚, 史敏, 沈炜, 唐泰山, 祝长青, 孔繁德

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摘要

为建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的非洲猪瘟病毒(ASFV)检测方法，根据ASFV保守区域设计引物探针，在荧光PCR检测方法的基础上，建立了检测ASFV的微滴数字PCR方法，对其特异性及线性关系进行评估，以阴性样品和低拷贝样品分别测定该方法的空白检测限(LOB)和最低检测限(LOD)。结果显示：该方法有较好的线性关系(R~2=0.999),与其他6种猪常见病毒及5种动物组织无交叉反应，LOB为1.6 copies/μL,LOD为3 copies/μL。利用建立的数字PCR、C1荧光PCR,以及世界动物卫生组织(WOAH)提供的荧光PCR和常规PCR方法对50份不同来源的样品进行检测，结果表明，建立的ASFV数字PCR检测方法具有高效、特异、灵敏等特点，可用于非洲猪瘟监测和口岸动物疫病防控。