沙门菌侵袭蛋白SipA的抗体制备及其在感染小鼠组织和巨噬细胞内的表达特点

摘要

旨在研究沙门菌侵袭蛋白SipA的表达特点。利用PCR技术从沙门菌中扩增SipA基因，然后将该基因克隆到原核表达载体pET-28a,转入至大肠杆菌BL21菌株，经诱导剂IPTG诱导表达重组蛋白SipA,纯化后的融合蛋白SipA免疫大耳白兔获得SipA抗体，利用沙门菌14028感染小鼠以及小鼠巨噬细胞Raw264.7后，通过免疫组化和免疫荧光鉴定SipA表达部位以及SipA在巨噬细胞内的分布。结果：成功表达重组蛋白SipA,纯化的SipA抗体通过间接ELISA法和Western blot检测其效价可达到1∶512 000,并具有较强特异性。免疫组化结果显示SipA在感染小鼠的空肠、肠系膜淋巴结、脾脏、肝脏、肺以及结肠均有表达，尤其在淋巴细胞和巨噬细胞的组织部位表达显著。细胞免疫组化以及细胞免疫荧光结果进一步揭示毒力蛋白SipA在Raw 264.7细胞的细胞质有大量表达，并且转位至细胞核。

关键词

沙门菌14028 / 毒力蛋白SipA / 多克隆抗体 / 表达特征