猪δ冠状病毒结构蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

摘要

旨在获得猪δ冠状病毒(PDCoV)结构蛋白并评价其免疫原性。通过RT-PCR技术，扩增PDCoV CZ2020株中完整的S、E、M和N基因，克隆至pCAGGS真核表达载体，构建pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M、pCAGGS-PDCoV-N真核表达质粒，经测序鉴定后转染HEK293T细胞，采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot(WB)方法检测PDCoV的S、E、M、N蛋白表达。将4种蛋白分别皮下注射BALB/c小鼠，制备重组蛋白多克隆抗体，并用WB法和IFA法测定抗体效价，评价免疫原性。结果表明，重组质粒pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M、pCAGGS-PDCoV-N能够在HEK293T细胞内正常表达，并与PDCoV阳性猪血清特异性结合。制备的4种重组蛋白的多克隆抗体效价可达1∶10 000以上，表明重组蛋白可诱导小鼠产生高水平抗体。本研究制备的多克隆抗体具有较强的免疫原性，能够为研制诊断试剂盒和新型疫苗提供基础。

关键词

PDCoV / 真核表达 / 抗原性分析