养殖鲫鲤疱疹病毒2型的鉴定及病毒囊膜蛋白ORF131多抗的制备

摘要

为了解鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)在南京地区养殖场鲫鱼中的发病情况，对南京某渔场疑似CyHV-2感染鱼，采集鳃、肾脏等组织进行解旋酶基因(hel)PCR扩增测序及遗传变异分析；通过蔗糖密度梯度离心从发病鲫鱼组织中提纯病毒粒子，电镜观察其形态；对CyHV-2的10种囊膜蛋白编码基因进行测序，并基于生物信息学分析选择理想的囊膜蛋白进行原核表达，免疫小鼠制备抗血清。结果显示：患鱼组织hel基因检测阳性，其序列与参考株ST-J1毒株hel基因序列(GenBank登录号：JQ85364)高度同源(99.67%),并位于同一进化分支；利用蔗糖密度梯度离心结合Western blot检测发现，病毒粒子存在于40%～46%蔗糖层，电镜观察显示直径在160 nm左右；10种囊膜蛋白中开放阅读框131 (ORF131)囊膜蛋白具有一段连续B细胞表位且抗原性良好，将ORF131原核表达、免疫小鼠后制备的抗血清ELISA效价达1∶4 000。本研究为南京地区CyHV-2感染的检测和防控提供了依据。

关键词

鲤疱疹病毒2型 / 鉴定 / 病毒纯化 / 囊膜蛋白 / 抗体制备