利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建伪狂犬病病毒UL21基因缺失重组病毒

摘要

旨在构建伪狂犬病病毒(PRV)UL21基因缺失重组病毒。采用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白系统9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术，设计针对UL21的单导向RNA(sgRNA),并构建UL21基因左右两侧同源臂质粒(pUC19 UL21-Left-Right-GFP),将其与PRV基因组共转染HEK-293T细胞，通过蚀斑纯化获得PRV-ΔUL21病毒，并通过PCR和Western blot检测方法鉴定该毒株成功缺失了UL21基因。结果表明，CRISPR/Cas9技术可用于构建PRV基因缺失重组病毒，为PRV致病机制研究提供重要依据。

关键词

伪狂犬病病毒 / UL21 / CRISPR/Cas9 / 基因缺失

基金资助

国家自然科学基金项目(32272985); 国家现代农业产业技术体系专项(CARS-35)