牛支原体脂蛋白LppB的多克隆抗体制备及对天然蛋白识别分析

摘要

旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因，并进行原核表达与纯化，制备其多克隆抗体，研究其对天然蛋白的识别能力。以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板，PCR扩增LppB基因，测序并比对分析；将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，诱导表达产物用Ni-NTA纯化，Western blot方法验证纯化重组蛋白，测定其反应原性；将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，并测定其ELISA效价，Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别。结果显示：PCR扩增的LppB基因全长约1 860 bp,与预期大小相符；LppB主要为可溶性表达，大小约为74 kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白，LppB蛋白具有良好的反应原性；制备出小鼠抗LppB多克隆抗体，ELISA效价为1∶25 600,能够识别天然LppB蛋白。本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体，为LppB功能研究奠定基础。

关键词

牛支原体 / 脂蛋白 / LppB / 原核表达 / 多克隆抗体