PEDV感染过程中TRIM5α介导的自噬对病毒复制的影响

摘要

旨在研究三结构域蛋白5α(tripartite motif protein 5α,TRIM5α)能否通过调控细胞自噬来影响猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea viru, PEDV)在非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)中的复制。利用Western blot(WB)检测自噬标志蛋白LC3Ⅱ的表达，明确PEDV感染Vero-E6细胞后不同时间点自噬的发生情况。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TRIM5α在自噬模型中的表达水平。设计并合成3条TRIM5α的干扰片段并筛选干扰效率最高的干扰片段，将其转染至Vero-E6细胞，PEDV感染后48 h,通过WB检测LC3Ⅱ蛋白的表达水平；RT-qPCR检测PEDV的N、ORF3基因的表达水平，同时检测PEDV滴度变化，以明确TRIM5α对自噬和PEDV复制的影响。结果表明：PEDV成功感染Vero-E6细胞并诱导细胞自噬。WB结果显示感染24、36和48 h时，试验组的LC3Ⅱ的表达量呈上升趋势，在48 h时表达量最高，且差异极显著(P<0.01),自噬被激活；RT-qPCR结果显示，TRIM5α的表达呈现上升趋势，在感染48 h时表达量最高，且差异极显著(P<0.01)。siRNA-2的干扰效果最好。干扰TRIM5α后，WB结果显示LC3Ⅱ蛋白表达量降低，自噬受到抑制，且RT-qPCR结果显示PEDV为N、ORF3基因的表达水平显著升高，病毒滴度明显上升。研究表明，TRIM5α通过促进细胞自噬抑制PEDV在Vero-E6细胞中的复制。

关键词

TRIM5α / 自噬 / 猪流行性腹泻病毒 / LC3Ⅱ蛋白

基金资助

重点领域科技攻关计划(2021AB012); 动物疾病防控兵团重点实验室开放课题(2020BTDJ06)