猪丁型冠状病毒N基因原核表达及多克隆抗体制备

刘磊; 何颖; 陈忠伟; 赵武; 段群棚; 赵硕; 梁家幸; 周英宁; 全琛宇; 许心婷; 陈婷婷; 许艺兰; 李斌; 蒋冬福; 卢敬专; 秦毅斌; 卢冰霞

畜牧与兽医 ›› 2023, Vol. 55 ›› Issue (02) : 67 -72.

刘磊, 何颖, 陈忠伟, 赵武, 段群棚, 赵硕, 梁家幸, 周英宁, 全琛宇, 许心婷, 陈婷婷, 许艺兰, 李斌, 蒋冬福, 卢敬专, 秦毅斌, 卢冰霞

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摘要

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)N蛋白的抗原性，为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导表达获得重组N蛋白，纯化后经Western blot方法检测其反应原性，免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法)。结果显示：重组N蛋白在IPTG终浓度为1.0 mmol/L,37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量，该重组蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达；Western blot结果显示，纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合，具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性。提示：PDCoV N蛋白抗原性好，可作为诊断试剂盒的候选抗原。