猪视网膜上皮细胞的分离培养与鉴定

张艳; 谢金文; 刘博; 曹宗喜; 谷英华; 魏凤; 王文秀

畜牧与兽医 ›› 2023, Vol. 55 ›› Issue (01) : 54 -59.

猪视网膜上皮细胞的分离培养与鉴定

张艳, 谢金文, 刘博, 曹宗喜, 谷英华, 魏凤, 王文秀

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摘要

旨在建立猪视网膜上皮细胞(PRECs)的分离纯化及传代培养方法。采用组织块贴壁法和消化法分离猪视网膜细胞(PRCs),经差速消化法纯化细胞，筛选确定最优培养条件并鉴定细胞生物学特性。结果：消化法分离的细胞约1周长成单层，组织块贴壁法约2周长满单层，但活力更高；PRCs主要形态为长梭形和大理石样，呈现为2种形态细胞混合生长；差速消化法纯化细胞后，经间接免疫荧光鉴定细胞角蛋白(CK18和CK19),确定该细胞为上皮细胞；细胞接种猪圆环病毒2型(PCV2)可产生明显病变。综上，本试验成功分离获得PRECs,含胎牛血清浓度为12%的α-MEM为最优培养基，该细胞支持PCV2增殖并产生明显的细胞病变，为进一步建立稳定传代的猪视网膜上皮细胞系及研究PCV2感染及致病机理提供基础。