单增李斯特菌溶血素LLS/LLO缺失株的构建及小鼠免疫保护性研究

摘要

旨在探究单增李斯特菌溶血素S/O(LLS/LLO)对单增李斯特菌(LM)的部分生物学特性影响及单增李斯特菌溶血素S/O基因缺失株的免疫原性。利用同源重组技术在本实验室已成功构建并保存的LM90SB2Δlls菌株基础上构建LM90SB2Δlls-Δllo,并绘制LM90SB2和LM90SB2Δlls-Δllo的生长曲线，测定半数致死量(LD_(50))、组织载菌量(同时采用灌服和腹腔注射方式)等，进行小鼠免疫保护性研究，分析溶血素基因llsB/hly缺失对LM的生长特性以及毒力的影响。结果：成功构建LM90SB2Δlls-Δllo缺失株，且能在体外稳定遗传。测定生长曲线，LM90SB2的生长活性略高于LM90SB2Δlls-Δllo; LM90SB2的LD_(50)为3.65×10~(7.23) CFU,LM90SB2Δlls-Δllo的LD_(50)大于2.7×10~9 CFU;通过灌服及腹腔注射，与LM90SB2相比，LM90SB2Δlls-Δllo在小鼠脑、肝、脾中的载菌量均明显减少，差异极显著(P<0.01)。抗体含量除第21天亲本株略高于缺失株，其余天数缺失株均略高于亲本株；通过小鼠免疫保护率结果分析，2株菌免疫后小鼠存活率均为75%,对照组小鼠存活率为30%。本研究表明，llsB/hly基因缺失对LM90SB2的毒力有明显影响，但并不会影响LM的免疫原性，缺失株LM90SB2Δlls-Δllo对亲本株LM90SB2的侵袭具有良好的免疫保护效果。

关键词

单增李斯特菌 / 溶血素 / llsB/hly基因 / 基因缺失 / 生物学特性 / 免疫保护性