猪圆环病毒2型感染性克隆的构建及拯救病毒的双抗体夹心ELISA鉴定

摘要

旨在构建猪圆环病毒2型(PCV2)感染性克隆，并利用双抗体夹心ELISA对拯救病毒进行鉴定。通过PCR从阳性病料中扩增出PCV2两种基因型2b与2d的全基因组DNA,并分别克隆入pMD-19T载体，获得2个重组质粒，命名为p19T-PCV2b与p19T-PCV2d。利用SacⅡ酶切获得l 767 bp的PCV2全基因组，并在体外分别用T4连接酶连接而环化，将环状基因组转染至PK-15细胞，传至P6代，利用间接免疫荧光试验(IFA)对拯救病毒进行鉴定，结果表明PCV2b与PCV2d感染性克隆可拯救出病毒。利用PCV2单克隆抗体(单抗)作为捕获抗体，用辣根过氧化酶(HRP)标记的PCV2多抗作为检测抗体，建立检测PCV2病毒粒子的双抗体夹心ELISA方法，用于PCV2拯救病毒的鉴定。将该检测方法与IFA和半数组织细胞感染量(TCID_(50))结果进行对比分析，结果显示，ELISA检测值与Image-J所计算的IFA荧光强度及TCID_(50)的相关系数分别达到0.7和0.8以上，说明该方法与IFA及TCID_(50)检测结果均具有较强的一致性，可以用于PCV2拯救病毒的快速鉴定。

关键词

PCV2 / 感染性克隆 / ELISA